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第六十六章 巨大收益求收藏求追读（第1页）

国家高技术研究发展计划（863计划），国家重点基础研究发展计划（973计划，含重大科学研究计划）都是国家相对超级高端的研究项目。

但凡想要拿到其中一个，都需要足够的积累。

当然，但凡能够拿到一个，也能让人功成名就，几百万的课题经费是小菜一碟，数千万的科研基金，也是很常见的。

而这样的一个项目启动资金，是袁威宏目前拿下的青年基金的百倍有余。

再要说什么的时候，外面做完检查复诊的病人，已经推开门。

袁威宏就不再说话，方子业也是赶紧开始薅自己的学识点，一步一步地进行阅片审视，精准诊断并用药，然后得到了0.9的学识点。

美滋滋地开心起来。

因为即便是中南医院，也不是那种疑难杂症遍地走的，疑难杂症自然不少，可也有简单的病种，病人挂号的时候，可不会考虑浪费资源这样的说法。

门诊完，方子业就又得到了15点左右的学识点，这一下，即便是加点打结术到了3级，给老师送礼物。

学识点的余额，一下子又累积到了60之多，还可以增加一个3级技能的同时，今天晚上，方子业还有细胞实验，即将收获，到时候观察结果，肯定又是一笔不菲的学识点。

“师父，我先放白大褂，然后去实验室了啊！”

“好，WB好好跑。”袁威宏交待，仿佛是在给方子业暗示，方子业在做什么，他都了然于心。

方子业点了点头，加快了脚步。

做实验、搞钱、发文章、学识点，充实且快乐。

WB是缩写，蛋白质免疫印迹（WesternBlot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。

一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质（或酶）。方子业研究的HK2，其实就是生物化学糖酵解过程中的第一個限速酶己糖激酶，而HK2则是己糖激酶的缩写，己糖激酶是催化己糖使之磷酸化的酶，它是糖酵解途径的第一个酶，也是糖酵解途径的绝对限速酶。

众所周知，糖酵解是糖转化为能量的第一步，没有糖酵解的第一步，葡萄糖和果糖想要被正常利用，是几乎不可能的事情，而如果依靠酮体等旁路作为有氧氧化的底材，肯定无济于事。

　　因此定量检测HK2的含量，在骨巨细胞瘤经过过表达、沉默后的绝对数量，是检测HK2在骨巨细胞瘤发展过程中作用的一个定量证据。

WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分……

原理听起来颇为复杂，但其实真正要操作的时候，主要的步骤主要是以下几步。

试剂准备，也就是让蛋白质跑的跑道，需要聚丙烯酰胺凝胶电泳来提供。

然后是参赛的运动员，是把肿瘤细胞裂解之后，使得内部的蛋白质充分释放，然后制作了标准曲线。

制作标准曲线之后，就可以让自己处理的细胞产生的‘运动员’开始上赛道了。

紧接着是电泳、转模、免疫反应、显影等等一系列后，通过特殊的抗体和试剂，就能够显示目标蛋白的胶片。

将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值……

这个过程很复杂，也相对漫长，更需要耐心。

不过，方子业反正已经下了门诊，来到实验室里，就一步一步地按部就班来做。且旁边还有洛听竹帮点小忙。

最后呈现出结果后，洛听竹欣喜异常：“方师兄，你今天这个条带显示很清楚欸，上一次范师兄跑出来的是哑铃状的。”

说完，她偏头看向方子业的成片，条带清晰、没有杂带、背景干净！

“呈哑铃状一般配置胶有问题，另外还有一种可能是样品中含有太多杂质，没有离心下来，然后杂质沉积在孔的中间，蛋白自然被推挤到两边。”

“配好胶，不合格的坚决不用，不要铤而走险。”方子业仔细想了一下原理，如此给洛听竹解释。

　　“那如果有条带拖尾呢？”洛听竹想了一下，又问了一个问题，应该是她跟着别人做的时候，看到过这样的情况。

“条带拖尾的话，一般是蛋白量浓度高或者，孵一抗浓度和时间太长。”

“蛋白含量高的话，可能是前期的文献准备没有确定好，我认为最有可能的是因为一抗浓度太高，作用时间太长引起。”

“当然也有其他原因。”方子业再次看了看自己的成片。

HK2与β-actin（肌动蛋白）内参两个条带，共有过表达、正常以及沉默三个组。

肿瘤细胞实验的内参，特别是涉及糖酵解通路的细胞实验内参，是不能选用常见的GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）的。

“你这张图，直接用prism进行作图就可以用了吧？”洛听竹继续问。

“应该差不多吧，条带的厚度灰度差距还是蛮明显的。拍个照，拍个照……”方子业赶紧让洛听竹也帮忙拍一张。

洛听竹欣然答应，灵动得如同一只勤劳的小松鼠。

而方子业此时，看着学识点飞速跳动到了134，一下子增加了足足七十点的学识点，也是知道啊，这一次的WB实验，在这一个课题之中的作用占比不小，可能是支撑整个课题规模的小骨架了。

“这张照片拍得怎么样？”洛听竹拍完后，问方子业。

方子业泛出姨母笑，而洛听竹则以为自己拍照的水平还不错，于是又咔咔地来了几张。

然后就是清理实验台并清洗相应的实验器材了。

一切结束，方子业建议：“洛师妹，辛苦了，一起去吃个宵夜吧？”

洛听竹这会儿正在左右翻看着WB成图的照片，歪着头点了一下：“好呀。”

……